三種內(nèi)阿米巴原蟲巢式多重PCR檢測方法
摘要：目的:建立能同時檢測糞便中溶組織內(nèi)阿米巴、迪斯帕內(nèi)阿米巴和莫氏內(nèi)阿米巴原蟲的巢式多重PCR方法;方法:根據(jù)溶組織內(nèi)阿米巴、迪斯帕內(nèi)阿米巴和莫氏內(nèi)阿米巴原蟲16S rDNA基因序列,設(shè)計1對阿米巴屬原蟲保守引物和3對不同內(nèi)阿米巴原蟲特異性引物,通過反應(yīng)體系優(yōu)化及特異性、敏感性等建立了巢式多重PCR方法,并對部分臨床樣本進行了檢測;結(jié)果:該巢式多重PCR方法能特異性擴增溶組織內(nèi)阿米巴、迪斯帕內(nèi)阿米巴和莫氏內(nèi)阿米巴原蟲目的片段,特異條帶大小分別為439、174、553 bp,區(qū)分明顯;該方法可檢測糞便樣品中阿米巴原蟲滋養(yǎng)體的最小值約為20個,在固定其它兩種內(nèi)阿米巴原蟲滋養(yǎng)體細胞數(shù)量的情況下,該方法最低能分別檢測到0.01個E.histolytica、1個E.dispar和0.1個E.moshkovskii滋養(yǎng)體。臨床樣本的檢測也顯示巢式多重PCR方法與單一PCR具有較高的一致性。結(jié)論:巢式多重PCR方法具有高度的特異性和敏感性,其在溶組織內(nèi)阿米巴、迪斯帕內(nèi)阿米巴和莫氏內(nèi)阿米巴原蟲的診斷和流行病學(xué)調(diào)查中具有重要的應(yīng)用價值。
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