適于基因組測序的高質(zhì)量桃線粒體DNA的高效提取方法
摘要：高質(zhì)量線粒體DNA(mtDNA)是線粒體基因組測序及序列分析的重要前提。為獲得高質(zhì)量桃mtDNA,以‘21世紀(jì)’桃葉片為外植體,24℃完全避光條件下進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)及增殖。對獲得的愈傷組織進(jìn)行勻漿化處理,結(jié)合差速離心、蔗糖襯墊和SDS裂解等方法提取并純化線粒體。結(jié)果表明:MS培養(yǎng)基添加3.0 mg·L-1 6-BA和1.0 mg·L-1 2,4-D可高效誘導(dǎo)并增殖桃葉片愈傷組織,誘導(dǎo)率可達(dá)到100%。熒光顯微鏡檢測顯示純化后的線粒體完整且具有活性。提取mtDNA的產(chǎn)率為13.10μg·g-1,無RNA和蛋白質(zhì)等其它雜質(zhì)污染。mtDNA電泳檢測條帶大小約為23 kb,無降解。特異性基因PCR檢測表明獲得的mtDNA不存在核DNA和葉綠體DNA污染,其純度可滿足后續(xù)分子生物學(xué)試驗(yàn)及高通量基因組測序的要求。該研究建立了一個(gè)適合桃mtDNA快速高效提取方法,為后續(xù)相關(guān)分子生物學(xué)研究提供了參考依據(jù)。
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北方園藝雜志
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