296位氨基酸位阻效應影響黃花蒿沒藥醇合酶環(huán)化反應的起始
作者：賀芳; 郝慶剛; 趙慧芳; 穆星; 楊倩; 劉會云; 李振秋 河北大學生命科學學院; 河北保定071002
摘要：【目的】探究黃花蒿沒藥醇合酶第296位氨基酸突變抑制環(huán)化反應的機制。【方法】利用Quik Change R Multi Site-Directed Mutagenesis的方法將黃花蒿沒藥醇合酶的296位氨基酸殘基由蘇氨酸突變成異亮氨酸。原核表達,蛋白純化后測定其催化特異性。【結(jié)果】黃花蒿沒藥醇合酶T296I體外催化（2E,6E）-法尼基焦磷酸主產(chǎn)物為非環(huán)化的法尼烯;但是將T296I蛋白與中間體（3R,6E）-橙花叔醇焦磷酸一起孵育時可生成環(huán)化的主產(chǎn)物α-bisabolol,野生型酶的天然產(chǎn)物。【結(jié)論】黃花蒿沒藥醇合酶T296I點突變進一步證明氨基酸殘基的空間體積和立體化學是自然環(huán)化反應起始的控制關(guān)鍵,其位阻效應能夠抑制法尼基焦磷酸向橙花叔醇焦磷酸轉(zhuǎn)化。
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北京農(nóng)學院學報
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