摘要:目的:建立標(biāo)準(zhǔn)化的阿膠蛋白酶解條件。方法:分別通過加熱法、超聲法及液氮碾磨法提取阿膠蛋白;通過二氯甲烷-環(huán)己烷萃取和超濾法純化阿膠蛋白;采用序列分析級(jí)胰酶進(jìn)行酶解,分別考察4個(gè)酶解參數(shù)(溫度、時(shí)間、酶的劑量和pH值)對(duì)酶解結(jié)果的影響,通過Tricine-SDS-PAGE法檢測酶解效果。結(jié)果:超聲法溶解阿膠樣品效果相對(duì)較好,酶解參數(shù)最佳條件為:酶解溫度38℃,pH 8.0,酶解時(shí)間12 h以上,底物與酶體積比在4:1-1:1范圍內(nèi),計(jì)算酶活為0.1-0.4 mU(mg/μmol)。結(jié)論:建立了標(biāo)準(zhǔn)化的阿膠肽圖前處理膠原蛋白胰酶酶解條件,為基于肽圖譜法阿膠鑒別及質(zhì)量控制方法的建立打下基礎(chǔ)。
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