摘要：昆蟲和植物在長期進化過程中形成相互作用的關(guān)系。其中植物次生物質(zhì)是植物防御昆蟲的主要機制,而昆蟲則以解毒酶來應(yīng)對。為了發(fā)現(xiàn)可用于害蟲防治的miRNA,通過對農(nóng)業(yè)害蟲斜紋夜蛾Spodopteralitura進食芥菜Brassicajuncea后中腸的測序分析,獲得了一系列差異表達的miRNA。通過生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)斜紋夜蛾miR-305-3p靶向了谷胱甘肽代謝中的谷氨酸半胱氨酸連接酶的催化亞基(Slgclc),這是一個谷胱甘肽從頭合成的限速酶;而miR-71-5p靶向調(diào)控gclc和解毒酶表達的轉(zhuǎn)錄因子SlNrf2。用芥菜的次生物質(zhì)吲哚-3-甲醇處理斜紋夜蛾Spli-221細胞株后,實時熒光定量PCR證明Slgclc和SlNrf2表達上調(diào),miR-305-3p和miR-71-5p表達下調(diào)。分別在斜紋夜蛾Spli-221細胞中超表達miR-305-3p及miR-71-5pmimics,Slgclc或SlNrf2轉(zhuǎn)錄水平下調(diào),并且miR-71-5pmimic處理抑制了SlNrf2下游基因Slgclc和解毒酶谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GSTs)的表達。結(jié)果表明:miR-305-3p和miR-71-5p響應(yīng)植物次生物質(zhì)而分別促進Slgclc和SlNrf2表達。然而雙熒光素酶實驗顯示miR-305-3p并不與Slgclc直接結(jié)合,miR-71-5p也不與SlNrf2直接結(jié)合,推測miR-305-3p和miR-71-5p可能間接調(diào)控Slgclc和SlNrf2的表達。研究結(jié)果表明,斜紋夜蛾miR-305-3p和miR-71-5p通過調(diào)控解毒酶GSTs表達及其底物谷胱甘肽的生成,而參與昆蟲抵抗植物次生物質(zhì)。