摘要：目的:探討針對p62雙sgRNA向?qū)RISPR/Cas9基因編輯效率。方法:采用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)成功敲除p62基因,通過細(xì)胞有限稀釋法和嘌呤霉素篩選,免疫印跡法驗證雙sgRNA和單sgRNA向?qū)У幕蚓庉嫵晒β?流式細(xì)胞儀驗證p62缺失對Hela細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果:免疫印跡分析得出雙sgRNA導(dǎo)向的p62敲除效率高于單sgRNA導(dǎo)向的敲除,靶序列測序比對分析確認(rèn)p62編碼基因發(fā)生大片段缺失突變。H2O2處理穩(wěn)定敲除的Hela細(xì)胞系顯示,p62基因敲除能明顯抑制Hela細(xì)胞H2O2誘導(dǎo)的早期細(xì)胞凋亡。結(jié)論:成功建立了p62敲除的Hela細(xì)胞系,雙sgRNA向?qū)У腃RISPR/Cas9基因編輯體系可能是一種更有效的編輯工具。