CRISPR/Cas9介導(dǎo)下高效敲除SQSTM1/p62基因的Hela細(xì)胞模型的建立
作者：姚建鳳; 李明; 黃榮富; 彭維林; 林建生; 連建烽; 楊曉煜; 鄭鳴 泉州市婦幼保健院兒童醫(yī)院; 泉州362000; 湖南醫(yī)藥學(xué)院; 懷化418000; 福建醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院; 泉州362000; 附屬福州市第一醫(yī)院; 福州350009; 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院; 福州350108
摘要：目的:探討針對p62雙sgRNA向?qū)RISPR/Cas9基因編輯效率。方法:采用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)成功敲除p62基因,通過細(xì)胞有限稀釋法和嘌呤霉素篩選,免疫印跡法驗證雙sgRNA和單sgRNA向?qū)У幕蚓庉嫵晒β?流式細(xì)胞儀驗證p62缺失對Hela細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果:免疫印跡分析得出雙sgRNA導(dǎo)向的p62敲除效率高于單sgRNA導(dǎo)向的敲除,靶序列測序比對分析確認(rèn)p62編碼基因發(fā)生大片段缺失突變。H2O2處理穩(wěn)定敲除的Hela細(xì)胞系顯示,p62基因敲除能明顯抑制Hela細(xì)胞H2O2誘導(dǎo)的早期細(xì)胞凋亡。結(jié)論:成功建立了p62敲除的Hela細(xì)胞系,雙sgRNA向?qū)У腃RISPR/Cas9基因編輯體系可能是一種更有效的編輯工具。
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解剖學(xué)雜志
解剖學(xué)雜志， 雙月刊，本刊重視學(xué)術(shù)導(dǎo)向，堅持科學(xué)性、學(xué)術(shù)性、先進性、創(chuàng)新性，刊載內(nèi)容涉及的欄目：論著、教學(xué)研究、變異畸形、問題討論、綜述、簡訊、專題報道·課程思政、專家論壇·紀(jì)念中國解剖學(xué)會成立一百周年、技術(shù)方法、專家論壇等。于1964年經(jīng)新聞總署批準(zhǔn)的正規(guī)刊物。
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