鯉浮腫病毒和錦鯉皰疹病毒三重PCR檢測方法的建立及初步應(yīng)用
作者：張文; 徐立蒲; 呂曉楠; 王小亮; 王姝; 王靜波; 曹歡 北京市水產(chǎn)技術(shù)推廣站; 北京100176
摘要：鯉浮腫病毒(Carp Edema Virus,CEV)和錦鯉皰疹病毒(Kio Herpes Virus,KHV)皆可感染錦鯉,對錦鯉養(yǎng)殖造成嚴重危害。本研究旨在建立一種可同時檢測CEV和KHV的三重PCR檢測方法。參考日本學(xué)者Oyamatsu等建立的nest-PCR方法和錦鯉皰疹病毒行業(yè)標準SC/T 7212.1—2011《鯉皰疹病毒檢測方法第1部分:錦鯉皰疹病毒》,分別選取擴增CEV P4a基因的548 bp片段,KHV TK基因的409 bp片段和KHV Sph基因的292 bp片段的3對特異性引物進行組合,考慮多重PCR擴增過程中的影響因素,優(yōu)化退火溫度和引物濃度,進行敏感性和特異性試驗。結(jié)果顯示,該方法能特異地擴增出3條目的條帶,大小分別是548 bp、409 bp和292 bp,最佳退火溫度為53℃,引物濃度均為0.3μmol/L。該方法對CEV和KHV的檢測限均為300 copies/μL,同時與其他水生動物病毒均無交叉反應(yīng)。因此,本研究建立的方法可用于錦鯉樣品中CEV和KHV的快速檢測。
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檢驗檢疫學(xué)刊雜志
檢驗檢疫學(xué)刊雜志， 雙月刊，本刊重視學(xué)術(shù)導(dǎo)向，堅持科學(xué)性、學(xué)術(shù)性、先進性、創(chuàng)新性，刊載內(nèi)容涉及的欄目：研究報告、應(yīng)用技術(shù)、科技管理、綜述、風(fēng)險分析等。于1991年經(jīng)新聞總署批準的正規(guī)刊物。
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