攜帶EGFP綠色熒光蛋白標(biāo)記的腺病毒的構(gòu)建及其在293A細(xì)胞中的包裝與表達
作者：趙芳 廣西醫(yī)科大學(xué)
摘要：目的:構(gòu)建顯示EGFP綠色熒光蛋白的腺病毒質(zhì)粒,在293細(xì)胞中包裝表達重組腺病毒顆粒。方法:以p Eentry-Ghrh-P2A-EGFP為模板,雙酶切出目的基因EGFP,將其與腺病毒穿梭載體Pentry-Trcp1連接為p Eentry-P2A-EGFP質(zhì)粒;腺病毒骨架載體質(zhì)粒PAd-DEST再與p Eentry-P2AEGFP質(zhì)粒同源重組為PAd--P2A-EGFP質(zhì)粒;用PEI介導(dǎo)轉(zhuǎn)染將PAd--P2A-EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到293A細(xì)胞,包裝成重組腺病毒顆粒。結(jié)果:PAd--P2AEGFP轉(zhuǎn)染到293A細(xì)胞中,合成熒光蛋白,熒光顯微鏡下細(xì)胞發(fā)綠色熒光。再次感染293A細(xì)胞,90%以上的細(xì)胞脫落,并且能見到綠色熒光。結(jié)論:顯示EGFP綠色熒光蛋白的腺病毒載體構(gòu)建成功,并能在293A細(xì)胞中完整包裝成重組腺病毒顆粒,為研究腺病毒載體特性提供參考依據(jù)。
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