摘要：對(duì)金針菇(Flammulina velutipes)冷誘導(dǎo)相關(guān)的組氨酸激酶基因HK1和HK 2構(gòu)建了基因組編輯(CRISPR/Cas9)pgfvs-Cas9-HK1-gRNA和pgfvs-Cas9-HK2-gRNA表達(dá)載體,探索了金針菇菌絲體及原生質(zhì)體對(duì)潮霉素的最低敏感濃度,利用PEG介導(dǎo)的方法將表達(dá)載體pgfvs-Cas9-HK1/HK2-gRNA轉(zhuǎn)化金針菇原生質(zhì)體,經(jīng)潮霉素篩選后的擬轉(zhuǎn)化子再進(jìn)行PCR鑒定。結(jié)果顯示:金針菇菌絲體及原生質(zhì)體對(duì)潮霉素的最低敏感濃度均為50μg/mL;經(jīng)潮霉素篩選后的部分?jǐn)M轉(zhuǎn)化子成功擴(kuò)增出Cas9的部分片段,攜帶有HK1、HK2基因載體的Cas9蛋白基因成功整合到了金針菇的基因組中,兩個(gè)表達(dá)載體轉(zhuǎn)化率分別為24.1%和12.5%。