泡菜中植物乳桿菌亞硝酸鹽還原酶的克隆表達
作者：吳長力; 陳穎琪; 陳桂柳; 林夢哲; 張宏梅 廣東工業(yè)大學(xué)生物工程系; 廣州510006
摘要：目的:對植物乳桿菌亞硝酸鹽還原酶基因(nirS)進行克隆及表達,檢測重組酶表達情況及其酶活力。方法:以分離自傳統(tǒng)泡菜植物乳桿菌的基因組DNA為模版進行PCR擴增nirS;重組構(gòu)建TA克隆質(zhì)粒pMD19-T-nirS,并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5a中保存;通過雙酶切消化將nirS基因連接到pET-32a(+)上,獲得重組表達質(zhì)粒pET-32a(+)-nirS,并將其轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)中誘導(dǎo)表達;重組酶經(jīng)純化后進行SDS-PAGE電泳檢測其表達情況;重組酶經(jīng)復(fù)性后檢測其酶活力。結(jié)果:擴增得到nirS基因并成功在大腸桿菌BL21(DE3)中表達,所得重組酶以包涵體形式存在,酶活力為2131.5U/mg。結(jié)論:采用基因工程技術(shù)獲得亞硝酸鹽還原酶具有一定的應(yīng)用前景。
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中國調(diào)味品雜志
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