雞粒細胞巨噬細胞集落刺激因子-豬干擾素α1融合基因在大腸埃希菌中的可溶性表達及其生物學(xué)活性研究
摘要：為可溶性表達重組雞粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(ChGM-CSF)與豬干擾素α1(PoIFNα1)融合蛋白,并研究其生物學(xué)活性,本研究分別提取雞、豬肝臟細胞總RNA,采用RT-PCR方法擴增ChGM-CSF和PoIFNα1基因,經(jīng)linker連接上述兩種基因后將其克隆于pET-32a原核表達載體,轉(zhuǎn)化E.coliBL21(DE3)菌株進行誘導(dǎo)表達,SDS-PAGE和western blot檢測融合蛋白表達產(chǎn)物。在ST細胞/VSV病毒測定系統(tǒng)以細胞病變抑制法滴定該融合蛋白的抗病毒活性;同時用MTT法檢測其對雞淋巴細胞增殖活性的促進作用。結(jié)果顯示,PCR擴增并融合后的ChGM-CSF和PoIFNα1融合基因約為1000bp,構(gòu)建重組表達載體后,誘導(dǎo)表達的rChGM-CSF-PoIFNα1融合蛋白分子量約55ku,主要存在于破碎菌體的上清中,表達量較高。Westernblot檢測結(jié)果顯示,該融合蛋白分別能夠與ChGM-CSF多抗和PoIFNα單克隆抗體特異性結(jié)合,其抗病毒比活性約為1.1×10^6IU/mg,并且具有促進雞淋巴細胞增殖的活性。本研究為rChGM-CSF-PoIFNα1重組融合蛋白的研制及其相關(guān)活性的測定提供實驗依據(jù)。
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